应用案例

微生物的确认

一、什么是微生物确认

空气中的活性粒子是洁净室中需要检测的重要对象之一,活性粒子本身可能携带活微生物,或其本身就是活微生物粒子。空气中的活性粒子(下称浮游菌),其含量的多少会直接影响无菌药品的灭菌程度。

二、标准对微生物确认的要求

ISO 14698-1微生物污染控制

提到微生物监测需要评估收集效率(Collection efficiency ),高的收集效率的采样方法和采样设备可以得到更有代表性的数据。对于生物负载环境低的环境,如A、B级环境,应当更多的采用主动采样的浮游菌采样,而不是被动采样的沉降菌方法。

ISO 14698-1 附录中对于微生物采样器 的收集效率提出了进行收集效率评估的指导意见。现行的2003版的ISO14698对于收集效率分为物理收集效率和生物收集效率,其中物理收集效率更在意的是采样方法是否有能力收集到空气的携菌粒子,而生物收集效率更在意的是采样器或者采样方法是否能在收集到的同时保证该携菌粒子的存活率。

GMP 2010 无菌附录1

第十一条 应当对微生物进行动态监测,评估无菌生产的微生物状况。监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法(如棉签擦拭法和接触碟法)等。动态取样应当避免对洁净区造成不良影响。成品批记录的审核应当包括环境监测的结果。

对表面和操作人员的监测,应当在关键操作完成后进行。在正常的生产操作监测外,可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。

GB/T 16292/16293

由于GB 50591中对于微生物检测的方法推荐依从GB/T 16292。在洁净室检测验证过程中,浮游菌采样是收集悬浮在空气中的活微生物粒子,通过专门的培养基,在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。单位是 CFU/m³。浮游菌采样器是一种高效的多孔吸入主动式式采样器,它基于安德森撞击原理,撞击速度为10.8m/s,相当于安德森撞击等级的第五级。参照GB/T 16292,最小采样点为房间面积开根号。采样点的位置为离地0.8m~1.5m左右。其他布置规则都可以在GB/T 16293内有提到。但是对于动态的检测,则应根据风险评估之后来选择合适的采样点和采样高度,并非一律的沿用静态的要求。

、检测方法及周期

1.检测方法

浮游菌采样可在静态或动态下进行,检测时一般采用φ90 x 15mm的培养皿,内含TSASDA培养基。测试前,宜先进行温湿度、风速风量和压差、以及高效检漏的测试,以确定浮游菌检测的环境条件。在空态或静态下,单向流环境的检测宜在空调系统运行不少于10分钟后开始;非单向流环境宜在空调系统运行不少于30分钟后开始。同时应对各类表面进行擦拭消毒,但不得对室内空气进行熏蒸。动态测试时应记录生产开始的时间以及测试时间。采样时,宜同时进行阴性对照试验,每次或每个区域取1个对照皿,无需暴露采样,与采样后的培养皿一同培养,结果应无菌落生长。

2.检测周期

微生物确认的最长间隔时间不宜超过6个月。

四、相关标准

ISO 14698-1:2003

GB 25916.1-2010

GB 16293-2010

GB 50591-2010